定氢的含二右美药和糖浆中主杂质溴酸量降解及防法同腐剂时测沙芬

2.6稳定性试验

取已知含量的法同腐剂供试品溶液，室温放置，时测沙芬分别于0、定氢的含2、溴酸4、右美药和8、糖浆12、中主杂质24h进样分析，降解及防记录色谱图。法同腐剂结果氢溴酸右美沙芬、时测沙芬5-羟甲基糠醛、定氢的含苯甲酸和羟苯乙酯峰面积的溴酸RSD分别为0.84%、1.03%、右美药和0.76%、糖浆1.48%，中主杂质表明稳定性良好。

2.7重复性试验

取同一批号的样品6份，按“2.2.2”项下方法进行操作，结果厂家A（批号190802）中氢溴酸右美沙芬、5-羟甲基糠醛、苯甲酸的平均含量分别为1.41、0.10、1.34mg·mL-1,RSD为0.53%、0.86%、0.46%；厂家B（批号190502）氢溴酸右美沙芬、5-羟甲基糠醛、羟苯乙酯的平均含量分别为1.90、0.05、0.29mg·mL-1,RSD为0.77%、1.32%、1.09%，表明方法的重复性良好。

2.8回收率试验

取同一批已知含量的供试品（批号190802）6份，每份1mL，置10mL量瓶中，分别精密加入对照品储备液适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”色谱条件进样，分别测定其峰面积，按外标法计算回收率和RSD，结果见表1。

2.9样品含量测定

取氢溴酸右美沙芬糖浆各批样品适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按外标法计算含量，结果见表2。

3讨论

3.1色谱条件的选择

本研究考察甲醇-水、甲醇-磷酸二氢铵缓冲液系统作为流动相，分别进行等度、梯度洗脱，在等度洗脱条件下几种组分分离不理想且耗时较长；采用梯度洗脱时发现，5-HMF极性大，在有机相比例较小时就很快出峰，而苯甲酸、氢溴酸右美沙芬、羟苯乙酯在有机相比例较高时才能较快出峰，为了缩短分析时间，在梯度程序的后半段调高了有机相比例。结果采用甲醇-磷酸二氢铵缓冲液系统并进行梯度洗脱，样品中各待测组分之间能够有效分离，且相邻成分不干扰测定。

3.2溶剂与提取方法的选择

在试验中对比了不同的提取溶剂水、50%甲醇、70%甲醇、甲醇对各成分的提取效果，结果以50%甲醇作为提取溶剂时，样品中所测成分综合提取效果最佳；同时考察超声时间0、5、10、20min对提取效果的影响，结果发现超声10min即可提取完全。

3.3测定波长的选择

试验采用DAD检测器，在190～400nm的范围内对待测成分色谱峰进行全波长扫描，氢溴酸右美沙芬、5-羟甲基糠醛、苯甲酸和羟苯乙酯分别在279nm、284nm、273nm、257nm处有最大吸收。根据四种成分的紫外光谱图进行分析，综合考虑，选择279nm波长较合适，在此波长条件下，四种组分均有较强响应值。

3.4结果分析

实验收集了市售的2个厂家共8批氢溴酸右美沙芬糖浆，结果显示，同一厂家的防腐剂用量无明显差异。《中国药典》2015年版四部通则中糖浆剂项下规定：苯甲酸用量不得过0.3%，羟苯酯类用量不得过0.05%。试验测得的8批样品中的防腐剂用量均在药典规定范围内。5-HMF在8批样品中均有检出，不同厂家不同批号之间5-HMF含量有明显差异。厂家A氢溴酸右美沙芬糖浆用量为一次20mL，一日3次，则5-HMF最大日暴露量为15.78mg；厂家B氢溴酸右美沙芬糖浆用量为一次15mL，一日3次，则5-HMF最大日暴露量为2.25mg，均远远高出了5-HMF作为2类遗传毒性杂质限度（TTC为1.5μg·d-1）的要求。

由于TTC是高度保守的暴露量，限度制定也需根据生产工艺难度及用药周期等情况进行调整。文献中报道，2015年版药典中收载的5%、10%葡萄糖注射液及以葡萄糖注射液为载体的制剂的最大日暴露量分别为1.75mg、3.5mg和5mg，根据样品中5-HMF检出情况，参考最大日暴露量5mg来制定本品的限度，经折算，厂家A（规格0.15%，每日最大用量60mL）的限度为0.08mg·mL-1，厂家B（规格0.2%，每日最大用量45mL）的限度为0.11mg·mL-1，结果，厂家B4批样品5-HMF均在限度范围内，厂家A有3批样品超出限度，建议完善生产工艺，或兼顾安全性和质量风险两方面的因素，综合考虑制定合适的限值。

防腐剂和遗传毒性杂质对人体的毒副作用越来越受到重视，有些厂家已经对口服液体制剂中的防腐剂或5-HMF进行质量控制并订入质量标准中，本研究建立的方法简便、准确、专属性强，既提高了氢溴酸右美沙芬糖浆的质量控制，又简化了检验过程，为修订该品种质量标准提供参考依据。

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